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一、临床分子生物学实验室

    本实验室为国家认可的基因扩增检验专业实验室。实验室总面积300平方米,设备总值800万元。实验室设基因检测和分析技术、蛋白质技术、细胞生物学(流式)功能单元。主要研究方向为(1)病原微生物鉴定及耐药基因分析;(2)肿瘤靶向治疗;(3)肿瘤相关基因突变鉴定;(4)病原微生物与宿主细胞相互作用研究。实验室专职研究人员12名,合同制实验人员6名,其中高级职称3名、中级9名。在国家211工程经费资助下近年来实验室新进购置了大量先进仪器,拥有ABI77007500型荧光定量基因扩增仪、LightCycler荧光定量基因扩增仪、蛋白质层析系统BD流式细胞分析仪、DiversiLab指纹图谱分析系等,可为全院的科研研究提供良好的实验技术平台。

(一)基因检测和分析技术功能单元
具体位置:西京医院检验科实验室2楼
单元简介: 基因检测和分析单元为国家认可的基因扩增检验专业实验室,拥有从DNA/RNA制备与目的基因检测一套较完整技术方法,配备了Eppendorf和ABI PCR、Roache和ABI荧光定量PCR仪、Bio-rad凝胶电泳分析仪仪、DiversiLab指纹图谱分析系统、DNAStar Lasergene分子生物学分析软件等全套设备,能独立进行引物设计、真核细胞和原核细胞DNA/RNA提取、反转录、常规PCR、梯度PCR、实时荧光定量PCR等系列试验。
可提供:引物、探针的设计和合成;实时荧光定量PCR方法建立和分析;普通PCR(定性)方法建立和分析;DNA指纹图谱分析等服务。
开放实验项目:
1.    引物、探针的设计
(1)项目说明:本实验室技术人员多年从事PCR实验,熟练掌握特异性引物和探针的设计和优化方法,根据GenBank基因序列,利用计算机软件帮助研究生设计引物和探针。
(2)收费标准:
  ① 引物对设计费用100/对(院内),100/对(院外)
  ② 探针设计费用100/条(院内),100/条(院外)
(3)联系方式:苏明权副主任技师 电话 775959,邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn
2. 实时荧光定量PCR扩增体系建立
(1)项目说明:首先设计特异性引物,并对反应体系及反应条件进行优化,通过对扩增产物的直接测序、灵敏性试验以及特异性试验对该反应体系进行综合评估,从而建立实时荧光定量PCR反应扩增体系来定量分析目的基因。主要技术路线:j构建重组质粒;k重组质粒标准品标准曲线的绘制;l荧光定量PCR检测体系的建立;m敏感性、特异性、稳定性验证。
(2)收费标准:5000/单个体系(院内);5000/单个体系(院外)。提供建立整个体系所需试剂,并给予技术指导。
(3)联系方式:
    苏明权副主任技师 电话 775959邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn
    ② 芦露技师         电话 771034
3. 实时荧光定量PCR扩增
(1)项目说明:本实验室拥有ABI 77007500,以及Roache LightCycler多台进口实时定量PCR仪,可定量分析目的基因。实时定量PCR技术是在DNA扩增的每个循环中加入含有荧光素的TAQ酶,检测样本中荧光素的含量,由此而得到一个曲线来实时反应被扩增目标中的目的片段的含量,同时可以通过溶解曲线获取目的样本的纯度是否达到目标。其与普通PCR相比具有获取数据实时、直观、并可通过质控品进行绝对定量、同时操作简单等特点,是目前分子生物实验基因实验中的主要发展方向。
(2)收费标准:不含试剂100元/次(院内),120元/次(院外)。
(3)联系方式:
    ① 苏明权副主任技师 电话 775959;邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn
    ② 芦露技师         电话 771034
4. 普通PCR扩增体系建立
(1)项目说明:可提供成套的PCR实验方案的设计、建立扩增体系。首先设计特异性引物,并对反应体系中MgCl2、引物、dNTP浓度以及引物退火温度优化后建立PCR反应扩增体系。通过对扩增产物的直接测序、灵敏性试验以及特异性试验对PCR反应体系进行综合评估。
(2)收费标准:1000/单个体系(院内),1000/单个体系(院外)。提供建立整个体系所需试剂,并给予技术指导。
(3)联系方式:
    ① 苏明权副主任技师 电话 775959,邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn
    ② 常亮技师         电话 775959
5. 普通PCR扩增
(1)项目说明:本实验室配备了Eppendorf和ABI进口PCR仪,具有高温度均一的加热模块,线性温度梯度,独立的半导体温度控制模块,最简易的操作界面。可将一段目的DNA片段通过一系列的反应扩增到十万到百万倍,从而使其可以通过肉眼观察到结果。具有高特异性、高精度的特点。
(2)收费标准:不含试剂100/次(院内),120/次(院外)。
(3)联系方式:
    ① 苏明权副主任技师 电话 775959;邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn
    ② 常亮技师         电话 775959
6. DNA指纹图谱分析
(1)项目说明:本实验室配备了全球微生物鉴定的领导者法国生物梅里埃公司最新的全自动微生物基因分型系统DiversiLab SystemDiversiLab系统是一个基于专利的rep-PCR(重复序列PCR)技术,该系统可以迅速而准确地在亚种和菌株水平上鉴别微生物分离株。每次可进行1~13个样本的分析。主要实验步骤:从微生物分离物里面提纯DNA;②使用合适的试剂盒对样品进行rep-PCR扩增;③扩增的片段通过在微流体DNA LabChip中进行电泳分离;④经由独立保护的网站进行实时的分析和报告
 (2)收费标准:1200/每份标本(院内),1200/每份标本(院外)。提供试剂,并给予技术指导。
(3)联系方式:
    ① 苏明权副主任技师 电话 775959;邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn
    杨柳主治医师     电话 775959;邮箱 zhangzh@fmmu.edu.cn
7. 基因组DNA的制备体系建立
(1)项目说明:本实验室技术人员多年从事细胞生物学实验,熟练掌握操作方法和技术,可指导建立提取真核、原核表达细胞的基因组DNA的方法,用于PCR、基因克隆、测序等后续工作。
(2)收费标准:500/单个体系(院内),500/单个体系(院外)。提供建立整个体系所需试剂,并给予技术指导。
(3)联系方式:
    ① 苏明权副主任技师 电话 775959;邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn
    ② 常亮技师         电话 775959
8. 基因组DNA的提取与纯化
(1)项目说明:基于本实验室成熟的细胞生物学实验操作方法和技术,对不同来源的样本进行基因组DNA的提取,并进行纯化。
(2)收费标准:50/每个标本(院内),50/每个标本(院外)。提供所需试剂,并给予技术指导。
(3)联系方式:
    ① 苏明权副主任技师 电话 775959;邮箱 jyksmq@fmmu.edu.cn

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